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Enzyme‐assisted HPTLC method for the simultaneous analysis of inositol phosphates and phosphate
(2023)
Background
The analysis of myo‐inositol phosphates (InsPx) released by phytases during phytic acid degradation is challenging and time‐consuming, particularly in terms of sample preparation, isomer separation, and detection. However, a fast and robust analysis method is crucial when screening for phytases during protein engineering approaches, which result in a large number of samples, to ensure reliable identification of promising novel enzymes or target variants with improved characteristics, for example, pH range, thermal stability, and phosphate release kinetics.
Results
The simultaneous analysis of several InsPx (InsP1‐InsP4 and InsP5 + 6) as well as free phosphate was established on cellulose HPTLC plates using a buffered mobile phase. Inositol phosphates were subsequently stained using a novel enzyme‐assisted staining procedure. Immobilized InsPx were hydrolyzed by a phytase solution of Quantum® Blueliquid 5G followed by a molybdate reagent derivatization. Resulting blue zones were captured by DAD scan. The method shows good repeatability (intra‐day and intra‐lab) with maximum deviations of the Rf value of 0.01. The HPTLC method was applied to three commercially available phytases at two pH levels relevant to the gastrointestinal tract of poultry (pH 5.5 and pH 3.6) to observe their phytate degradation pattern and thus visualize their InsPx fingerprint.
Conclusion
This HPTLC method presents a semi‐high‐throughput analysis for the simultaneous analysis of phytic acid and the resulting lower inositol phosphates after its enzymatic hydrolysis and is also an effective tool to visualize the InsPx fingerprints and possible accumulations of inositol phosphates.
BioPower
(2009)
Das Projekt BioPower ist eine Kooperation des Instituts für Angewandte Forschung (IAF) der Hochschule Offenburg mit dem Institut für Mikrosystemtechnik (IMTEK) der Universität Freiburg. Es handelt sich um den Versuch, die im Körper vorhandenen Energiequellen sozusagen direkt anzuzapfen, um sie für technische Zwecke zu nutzen. Von den vielen bestehenden Möglichkeiten konzentriert sich die Forschung hier auf die Nutzung der Glukose im Blut, die auch sonst als Energieträger zur Versorgung der Zellen im Körper dient.
Rudolf E. Kaiser
(2020)
Editorial
(2020)
Editorial
(2020)
Editorial
(2022)
Editorial
(2022)
Editorial
(2020)
Editorial
(2022)
Editorial
(2021)
Editorial
(2020)
Editorial
(2020)
Editorial
(2022)
Editorial
(2022)
Editorial
(2022)
Wir präsentieren die weltweit erste Auswertung einer zweidimensional entwickelten HPTLC-Platte (2D-HPTLC) mit Hilfe eines Diodenarray Scanners. Das System erreicht eine räumliche Plattenauflösung von 250 µm. Es können Absorptions- und Fluoreszenzspektren im Wellenlängenbereich von 190 bis 1000 nm mit einer spektralen Auflösung von besser als 1 nm gemessen werden. Eine Trennzahl von 259 wurde erreicht. Damit zeigt die Methode bessere Trenneigenschaften als die meisten HPLC-Systeme. Der Nachteil der 2D-Auswertung ist der hohe Zeitbedarf von über 3 Stunden für eine Plattenmessung.
Editorial
(2021)
Editorial
(2021)
Editorial
(2021)